postupak ekstrakcije silimarina
Silimarin, smjesa flavonolignana koja pokazuje mnoge farmakološke aktivnosti, dobiva se iz plodova mlijeka čička (Silybum marianum L. Gaertner). Zbog visokog sadržaja lipida u plodovima čička, Evropska farmakopeja preporučuje postupak njegove ekstrakcije u dva koraka. Prvo se plodovi odmašćuju 6 sati, koristeći n-heksan; drugo, silimarin se ekstrahira metanolom još 5 sati.
Izneseni podaci pokazuju da se ovaj izuzetno dugi tradicionalni postupak ekstrakcije Soxhlet može skratiti na nekoliko minuta pomoću ekstrakcije tečnosti pod pritiskom (PLE). PLE takođe omogućava uklanjanje faze odmašćivanja koja je potrebna u tradicionalnom postupku, čime se pojednostavljuje postupak ekstrakcije silimarina i sprečava gubitak silimarina uzrokovan odmašćivanjem. Oporavci PLE-a dobiveni u optimiziranim uvjetima ekstrakcije očito su bolji od onih dobivenih postupkom ekstrakcije Soxhlet-a koji je preporučila farmakopeja.
Prinosi PLE silikristina, silidijanina, silibina A, silibina B, izosilibina A i izosilibina B u acetonu iznose 3,3, 6,9, 3,3, 5,1, 2,6 i 1,5 mg / g plodova bez masti. Petodnevna Soxhletova ekstrakcija metanolom na odmašćenom voću daje samo ~ 72% količine silimarina dobijene za 10 minuta PLE na 125 ° C.
Šta je Silybum?
Silybum marianum L. Gaertner, obično se naziva imlijeko čička, blagoslovljena mlijeko čička, Marijanska čička, Mary čička ili Saint Mary' Thistle, jednogodišnja je ili dvogodišnja biljka iz porodice Asteraceae. Biljka, koja je izvorno rasla u južnoj Evropi i Aziji, danas se nalazi u cijelom svijetu (1). Ovaj problematični korov trenutno se uzgaja kao ljekovita biljka i jedna je od najvažnijih ljekovitih kultura u Europi.
Mlijeko čička koristi se u medicinske svrhe više od 2000 godina, najčešće za liječenje bolesti jetre (ciroza i hepatitis), kao i za zaštitu jetre od otrovnih tvari (2–5). Interes za nedavna istraživanja za ovu biljku potaknut je studijama koje pokazuju njezinu izuzetno visoku antitumorsku aktivnost. Ekstrakti iz biljke sada se intenzivno proučavaju u eksperimentalnoj hemoprevenciji raka i u poboljšanju nuspojava hemoterapije (6). Nedavna izvješća pokazala su da ekstrakte iz ove biljke karakteriziraju i mnoge druge farmakološke aktivnosti, poput protuupalnih i antifibrotičkih učinaka (2, 7, 8).
Silimarin, mješavina flavonolignana koji pokazuje mnoge farmakološke aktivnosti, dobiva se iz sjemenki mlijeka čička (Silybum marianum L. Gaertner). Uobičajeni postupci koji se do sada koriste za ekstrakciju silimarina zasnivaju se uglavnom na sporim metodama ekstrakcije rastvarača na visokoj temperaturi. Nedostaci povezani sa ovim tehnikama doveli su do potrage za novim alternativnim procesima ekstrakcije koji bi se dodatno mogli poboljšatiekstrakti silimarinakvaliteta. Ovo posljednje je posebno važno u pogledu primjene silimarina. Dobiveni ekstrakti silimarina bi u stvari mogli sadržavati toksične organske ostatke koje treba ukloniti kako bi se zadovoljila prihvatljivost potrošača.
U pokušaju da poboljšaju postupak ekstrakcije silimarina i učine ga učinkovitijim i ekološki prihvatljivijim, nedavno ekstrakcija rastvarača uz pomoć mikrovalne pećnice, ekstrakcija rastvarača uz pomoć ultrazvuka, ekstrakcija tekućine pod pritiskom, ekstrakcija uz pomoć enzima, ekstrakcija nadkritične tekućine i posebno ekstrakcija vode podkritičnim poznate i kao metode ekstrakcije tople vode pod pritiskom su razvijene i primijenjene.
Materijali i metode
Biljni materijal
Suho voće S. marianum L. Gaertner kupljeno je u lokalnoj ljekarni (Lublin, Poljska) u jesen 2011. Dovoljno velik reprezentativni uzorak biljnog materijala (oko 500 g) samljeven je i prosijan da bi se dobila veličina čestica od 0,4 mm Za vađenje su korišteni precizno izvagani dijelovi materijala.
Materijali i reagensi
Standardizirani suhi ekstrakt S. marianum L. Gaertner i silibin B (čistoće 98%), koji se primjenjuju kao standardi, kupljen je od Sigma-Aldrich, Poljska. Aceton, etil acetat, fosforna kiselina, n-heksan (svi oni analitičkog razreda reagensa) i metanol (analitički reagensi HPLC) su kupljeni od poljske hemijske fabrike (POCh, Gliwice, Poljska). Voda je pročišćena pomoću Milli-Q sistema iz Millipore (Millipore, Bedford, MA, SAD). Neutralno staklo, dobijeno na poklon iz lokalne staklane (frakcija 0,4–0,6 mm), primijenjeno je kao sredstvo za dispergiranje u PLE ćeliji.
Ekstrakcija tečnosti pod pritiskom
PLE je izveden s instrumentom Dionex ASE200 (Dionex Corp., Sunnyvale, CA, SAD). Biljni materijal (0,5 g) pomiješan je s inertnim materijalom (neutralno staklo) i smješten u ekstrakcijsku ćeliju od 22 ml od nehrđajućeg čelika koja sadrži filtrirajući papir na dnu. Još jedan krug filtarskog papira postavljen je na vrh ćelije za ekstrakciju. Napokon, ćelija je bila dobro zatvorena i stavljena u peć za grijanje.
Sadržaj ćelije ekstrahiran je pod radnim pritiskom od 60 bara. Na kraju postupka, ekstrahirani uzorak ispran je upotrebom zapremine rastvarača jednake 60% od količine ekstrakcijske ćelije. Na kraju, uzorak je pročišćen tokom 60 s primjenom azota pod pritiskom (150 psi.), A ekstrakt je sakupljen u staklenu bočicu od 60 ml s gumenom kapom presvučenom teflonom. Količina prikupljenog ekstrakta bila je između 25 i 31 ml, ovisno o gustoći pakovanja ekstrakcijske ćelije. Dobijeni ekstrakt je prebačen u odmjernu tikvicu od 50 ml i dopunjen do svoje zapremine odgovarajućim tipom rastvarača. Izvedena su tri nezavisna vađenja pod istim uslovima. Između ciklusa, sistem je ispran odgovarajućim ekstrakcionim rastvaračem.
PLE parametri koji su ispitivani bili su tip rastvarača (metanol, aceton i etil acetat), temperatura (50, 75, 100, 125 i 150 ° C), vreme (5, 10, 15 i 20 minuta) i broj ciklusa ekstrakcije (1 –5). Za postupak odmašćivanja PLE, n-heksan je primijenjen kao rastvarač, a ispitivani parametri su temperatura (50 i 100 ° C) i vrijeme (5 i 10 minuta) uklanjanja lipida. Ekstrakti acetona i etil acetata su ispareni do suhog u vakuumu i ponovo rastvoreni u metanolu pre hromatografske analize.
Soxhlet ekstrakcija
Iscrpna ekstrakcija u Soxhletovom aparatu izvedena je pomoću delova materijala od 2 g. Precizno izvagani uzorci prebačeni su na naprstak za papir. Napunjeni naprstak umetnut je u ekstraktor Soxhlet od 100 ml. Ekstrakcije su izvedene u dvostepenom procesu (n=3). U prvom koraku postupka biljni materijal je odmašćen 6 sati upotrebom 75 ml n-heksana. U drugom je silimarin ekstrahiran tokom 5 sati sa 75 ml metanola. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, dobijeni ekstrakt prebačen je u odmjernu tikvicu od 100 ml, koja je potom do svoje zapremine metanolom. Izvršena su tri nezavisna vađenja.
Hromatografska analiza ekstrakata
HPLC mjerenja izvršena su na Dionex tečnom hromatografu (Dionex Corp.) koji se sastoji od kućišta za hromatografiju (LC20) koji sadrži PEEK automatizirani ventil za ubrizgavanje opremljen petljom uzorka od 10 μL, gradijentnom pumpom (GP50), detektorom apsorbancije (AD25) i detektor niza fotodioda (PDA100). Čitav hromatografski sistem bio je pod kontrolom sistema za prikupljanje podataka PeakNet6. Hromatografsko razdvajanje izvršeno je na 40 ° C pomoću Prodigy ODS-2 kolone (5 μm, 250 × 4,6 mm, ID) (Phenomenex, Torrance, CA, USA). Pokretna faza A bila je smeša metanola sa vodenom otopinom fosforne kiseline koja je sadržavala 0,5 ml 75% fosforne kiseline u 100 ml rastvora (35: 65, v / v). Pokretna faza B bila je smjesa metanola s vodenom otopinom fosforne kiseline koja je sadržavala 0,5 ml 75% fosforne kiseline u 100 ml otopine (50: 50, v / v). Brzina protoka bila je 0,8 ml / min. Analize su izvedene u gradijentu pokretne faze s procentom B u A koji se mijenjao kako slijedi: početna koncentracija, 0% B; 28 min, 100% B; 35 min, 100% B, 36 min 0% B. Prije sljedeće analize, kolona je uravnotežena korištenjem mobilne faze koja sadrži 0% B tijekom 20 minuta. Svaki ekstrakt je HPLC-analiziran tri puta. Talasna dužina za otkrivanje flavonolignana postavljena je na 288 nm, a za karakterizaciju vrha zabilježeni su i UV-Vis spektri od 210 do 500 nm.
Kvalitativna analiza ekstrakata provedena je usporedbom vremena zadržavanja vrhova i njihovih UV-Vis spektara u ekstraktima u odnosu na standardizirani suvi uzorak silimarina. Za pripremu standardizirane suve otopine silimarina, uzorak od 0,02 g koji sadrži 5,0 mg silinina A + B rastvoren je u 50 ml metanola. Vrhovi za silichristin, sililydianin, silybin A, silybin B, izosilybin A i B pojavili su se u retencijskim vremenima od 15,1, 17,4, 27,5, 29,1, 33,6 i 34,8 min, respektivno. Kvantitativna analiza temeljila se na silibin B standardu, a korištena je vanjska standardna metoda. Kalibracijska krivulja generirana je iz pet koncentracija spoja u rasponu koncentracija od 0,1–1,0 mg / ml. Izvršena su tri mjerenja površine vrha za svaku koncentraciju standardnog rastvora. Karakteristični parametri dobivene kalibracijske krivulje bili su sljedeći: nagib, 0,516 i presjek, 0,003. Utvrđeno je da je kalibracijska krivulja linearna u ispitivanom rasponu koncentracija. Utvrđeno je da je koeficijent korelacije> 0,995. Zbog poteškoća pri kupovini standarda silichristin, sililydianin, silybin A, izosilybin A i B, količine ovih spojeva izračunate su povezivanjem njihovih hromatografskih odgovora s kalibracijskom krivuljom za silybin B.
Statistička analiza
Svi podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD). Analiza varijanse (ANOVA) i F-test korišćeni su za procenu uticaja uslova PLE na prinos silimarina. Srednje vrijednosti smatrale su se značajno različitim kada su se rezultati upoređenih parametara razlikovali na nivou P=0,05 značajnosti. Da bi se provjerila značajnost svakog Fisherovog koeficijenta, korištene su P-vrijednosti.
Rezultati
Na slici 1a prikazan je tipični hromatogram ekstrakta PLE dobivenog iz plodova S. marianum L. Gaertner, dok je na slici 1b prikazan hromatogram ekstrakcije silimarina iz rastvora mlijeka čička pripremljenog otapanjem standardiziranog suvog ekstrakta S. marianum L. Gaertner u metanolu (1 mg / ml). Analiza hromatograma ekstrakata PLE ili Soxhlet sa onim za standardiziranu otopinu (vrijeme zadržavanja, UV-Vis spektri i indeks vršne čistoće) pokazala je da primijenjeni hromatografski uvjeti omogućuju dovoljnu rezoluciju ispitivanih spojeva, vrhovi brojevi od 1 do 6 iz komponenata matrice uzoraka. Vrhovi su identificirani kao: (1) silikristin, (2) silidijanin, (3) silibin A, (4) silibin B, (5) izosilibin A i (6) izosilibin B.
Kako izvući čičak?
Za razliku od većine biljaka, sjeme čička ne ekstrahiraju se dobro u vodi, zato nemojte pokušavati od njih napraviti šalicu čaja! Umjesto toga pojedite svježe mljeveno sjeme ili uzmite kvalitetnu kapsulu. Ako koristite sjemenke, kupite ih cijele, a zatim sameljite po potrebi (ja koristim mlin za kavu kako bih ih napravila u grubi prah). Sjeme odjednom ima uljni, slatki i gorki okus - možda je stečeni ukus, ali uopće nije neugodan. Započnite s uzimanjem 1/2 do 1 žlice dnevno posute po vašoj hrani i pogledajte kako vam se čini, prilagođavajući količinu po potrebi.
Sastojci
1 šolja mlake vode
1 šolja alkohola od 100 čaja koristim votku
¾ do 1 šolje sjemena mlijeka čička ako je moguće mljeveno
Instrukcije
Sterilizirajte Mason staklenku koja se koristi stavljanjem u kipuću vodu na približno 10 minuta ili stavljanjem na rešetku u pećnicu na oko 250 stepeni na 15 minuta.
Sve sastojke prelijte u masonsku teglu.
Postavite novi poklopac na teglu i čvrsto ga zavrnite prstenom.
Snažno protresite teglu oko 1 minute.
Stavite teglu na hladno tamno mjesto na pet tjedana.
Svakodnevno protresite teglu kako biste osigurali da sjeme čička ne ispliva do vrha i da se u potpunosti ulije u alkohol i vodu.
Na kraju određenog broja tjedana, procijedite mlijeko od tekućine kroz cjediljku s finom mrežicom - zadržavajući tekućinu. Ako nemate cjediljku s finom mrežicom, upotrijebite malo cjedilo i / ili podstavite cjedilo s nekoliko filtera za kavu kako biste smanjili veličinu otvora.
Koliko dugo mlijek čička stupa na snagu?
Sjeme čička može zaštititi ćelije jetre od otrovnih hemikalija i lijekova. Čini se da takođe ima snižavanje šećera u krvi, antioksidativne i protuupalne efekte.
Poboljšanje parametara oksidativnog stresa konstantno je zabilježeno tokom šest mjeseci' trajanje tretmana specijalizovanim sistemom za isporuku čička (2). Poboljšanje u obrascima oksidativnog stresa odgovorno je za poboljšanu signalizaciju insulina i funkcionisanje ćelija jetre.
Koliko dugo treba uzimati čičak? (DOZIRANJE mlijeka čička)
Mlijeko čička smatra se sigurnim u dozama od 420 mg / dan oralno u podijeljenim dozama do 41 mjesec. Jedan izvor sugerira dnevne doze od 12 do 15 g suhog voća za dispepsiju i poremećaje bilijarnog sustava, dok se ekstrakt koji sadrži 200 do 400 mg silimarina dnevno smatra učinkovitim kod različitih poremećaja jetre.
Prednosti mlijeka čička
1. Podržava zdravlje jetre
Jedna od najčešćih upotreba mlijeka čička je za liječenje problema jetre. Studija iz 2016. otkrila je da mlijeko čička poboljšava oštećenje jetre kod miševa uzrokovano prehranom. Potrebno je više dokaza kako bi dokazali da mlijeko čička na isti način koristi ljudskoj jetri. Međutim, istraživači teoretiziraju da to čini. Aktivni sastojak mlijeka čička, silimarin, djeluje kao antioksidans smanjujući proizvodnju slobodnih radikala. Znanstvenici misle da ovo stvara detoksikacijski učinak, zbog čega mliječ čička može biti koristan za probleme jetre.
Dok se ne sprovedu dodatna istraživanja, mlijeko čička se ne preporučuje kao primarna opcija liječenja problema s jetrom. Ali možda je korisno komplementarno liječenje isprobati.
2. Promovira zdravlje kože
Ulje mlijeka čička može se lokalno koristiti za poboljšanje zdravlja kože.
Mliječni čičak može pomoći u promicanju zdrave kože. Studija iz 2015. godine pokazala je da mlijeko čička pomaže poboljšanju upalnih stanja kože kada se nanosi na kožu miševa.
U drugoj studiji takođe je utvrđeno da mlijeko čička ima antioksidativni i anti-age učinak na ćelije ljudske kože u laboratorijskom okruženju.
Potrebna su dalja istraživanja na ljudima kako bi se utvrdilo koje koristi osoba može očekivati od nanošenja mlijeka čička na svoju kožu.
3. Smanjuje holesterol
Visok holesterol može dovesti do problema sa zdravljem srca i povećati šanse za moždani udar.
Studija iz 2006. godine sugerira da čičak može igrati važnu ulogu u održavanju nivoa holesterola. Otkrilo je da su nivoi holesterola niži kod ljudi koji uzimaju mliječ čička za liječenje dijabetesa od onih koji uzimaju placebo.
4. Podržava gubitak kilograma
Prvo istraživanje na životinjama provedeno 2016. godine pokazalo je da silimarin uzrokuje gubitak kilograma kod miševa koji su hranjeni dijetom namijenjenom povećanju tjelesne težine.
To sugerira da čičak može biti koristan za one koji žele smršavjeti. Međutim, potrebno je više istraživanja o efektima čička na gubitak kilograma kod ljudi.
5. Smanjuje rezistenciju na insulin
Studija na miševima otkrila je da je ekstrakt mlijeka čička pomogao smanjiti rezistenciju na inzulin. Otpornost na inzulin je problem za ljude sa dijabetesom tipa 2.
Iako ovo istraživanje sugerira da čičak može igrati ulogu u upravljanju dijabetesom, potrebno je još istraživanja kako bi se potvrdilo smanjuje li čičak mliječnu rezistenciju na inzulin i podržava li upravljanje dijabetesom.
6. Poboljšava simptome alergijske astme
Aktivni sastojak mlijeka čička može pomoći u smanjenju upale. Studija iz 2012. otkrila je da silimarin pomaže u zaštiti od upale u dišnim putevima miševa s alergijskom astmom.
Potrebno je više istraživanja kako bi se utvrdilo koristi li silimarin simptomima astme kod ljudi.
7. Ograničava širenje raka
Mliječna čička može pomoći u zaustavljanju širenja određenih vrsta karcinoma. Pregled iz 2016. godine pokazao je da ekstrakt mlijeka čička inhibira rast ćelija karcinoma kod karcinoma debelog crijeva.
Potrebno je više istraživanja kako bi se utvrdilo kako se čičak može koristiti u borbi protiv raka.
8. Podržava zdravlje kostiju
Čaj od čička može pomoći u prevenciji gubitka kostiju uzrokovanog nedostatkom estrogena. Mliječna čička može igrati ključnu ulogu u podršci zdravlju kostiju. Studija iz 2013. otkrila je da mlijeko čička pomaže u prevenciji gubitka kostiju. Studija se posebno bavila gubitkom kostiju uzrokovanim nedostatkom estrogena. Još uvijek nije jasno je li mliječ čička podjednako koristan za gubitak kostiju s različitim uzrokom. Potrebne su daljnje studije prije nego što se može sigurno zaključiti da mlijeko čička podržava zdravlje kostiju kod ljudi.
9. Poboljšava spoznaju
Studija iz 2015. godine otkrila je da mlijeko čička povećava otpornost na oksidativni stres. Oksidativni stres potencijalni je uzrok Alzheimerove bolesti.
Na taj način, mlijeko čička može pomoći u poboljšanju kognicije i liječenju degenerativnih stanja koja utječu na um. Potrebno je više istraživanja na ljudima kako bi se potvrdili učinci mlijeka čička na kogniciju.
10. Jača imunološki sistem
Mliječna čička može pomoći u jačanju imunološkog odgovora osobe&i pomoći će im u borbi protiv infekcije.
Studija iz 2016. na životinjskom modelu otkrila je da ekstrakt čička poboljšava imunitet kada se konzumira. Starije istraživanje pokazalo je da ekstrakt čička ima pozitivan učinak na imunološki odgovor kod ljudi.
Potrebno je više studija sa ljudskim sudionicima prije nego što naučnici sa sigurnošću mogu reći da mlijeko čička pojačava čovjekov imuni sistem.
Nuspojave mlijeka čička
Čini se da mlijek čička ima malo nuspojava, čak i ako se uzima nekoliko godina. Neki ljudi imaju mučninu, proljev, svrbež i nadutost.
Za masovni mliječ čička u prahu kontaktirajte nas naherbext@undersun.com.cn
Reference: https: //academic.oup.com/chromsci/article/53/2/366/307144
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128093801000152
https://www.cambridgenaturals.com/blog/milk-thistle-food-for-the-liver
https://www.survivalsullivan.com/milk-thistle-extract/
https://www.webmd.com/digestive-disorders/milk-thistle-benefits-and-side-effects
https://www.medicalnewstoday.com/articles/320362#how-to-use-milk-thistle
